NAT MED：特异性基因编辑防止耳聋
2019-07-06 海北 MedSci原创
为了克服这些限制，研究人员筛选了14种Cas9 / gRNA组合，用于特异和有效地破坏引起显性进行性听力损失的核苷酸替代DFNA36。
由于大多数显性人类突变是单核苷酸取代，研究人员探索基因编辑策略以有效和选择性地破坏显性突变，而不影响野生型等位基因为准。
然而，单核苷酸区分可能难以实现，因为常用的核酸内切酶，例如酿脓链球菌Cas9（SpCas9），可以耐受指导RNA（gRNA）和靶DNA之间多达七个错配。此外，一些Cas9酶中的原型间隔区相邻基序（PAM）可以耐受与靶DNA的错配。
为了克服这些限制，研究人员筛选了14种Cas9 / gRNA组合，用于特异和有效地破坏引起显性进行性听力损失的核苷酸替代DFNA36。
作为DFNA36的模型，研究人员使用Beethoven小鼠，其在Tmc1中具有点突变，Tmc1是听觉所需的基因，其编码内耳毛细胞中的机械感觉转导通道的成孔亚基。
研究人员鉴定了金黄色葡萄球菌Cas9（SaCas9-KKH）的PAM变体，其在贝多芬小鼠和DFNA36人细胞系中选择性且有效地破坏突变等位基因，但不破坏野生型Tmc1 / TMC1等位基因。
腺相关病毒（AAV）介导的SaCas9-KKH在注射后一年内预防了贝多芬小鼠的耳聋。
对当前ClinVar条目的分析显示，使用类似方法可以靶向~21％的显性人类突变。
原始出处：
György B et al. Allele-specific gene editing prevents deafness in a model of dominant progressive hearing loss. NAT MED, 2019; doi: 10.1038/s41591-019-0500-9.
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