JCLA:基于高分辨熔融分析的三种P‐选择素基因多态性基因分型快速方法的开发与验证
2019-07-14 Gladiator MedSci原创
高分辨熔融(HRM)分析是一种较新的、可靠的、敏感的基因分型技术,因为其可以帮助可以节省大量的时间和成本。P‐选择素是一种粘附分子,在炎症反应中白细胞与受刺激血小板和内皮细胞粘附的初始阶段起作用。本文描述了P‐选择素基因(SELP)中影响蛋白序列的多种多态性。本研究的目的是设计、优化并验证一种简单、快速的基于内部HRM的NM_003005.3:c 992 g > A (c.992G >
高分辨熔融(HRM)分析是一种较新的、可靠的、敏感的基因分型技术,因为其可以帮助可以节省大量的时间和成本。P‐选择素是一种粘附分子,在炎症反应中白细胞与受刺激血小板和内皮细胞粘附的初始阶段起作用。本文描述了P‐选择素基因(SELP)中影响蛋白序列的多种多态性。本研究的目的是设计、优化并验证一种简单、快速的基于内部HRM的NM_003005.3:c 992 g > A (c.992G >), NM_003005.3: c。1918G>T (c.1918G>T), NM_003005.3:c。2266A>C (C .2266A>C) SELP多态性的基因分型方法。
采用聚合酶链反应(PCR)和序列特异性引物(SSP)对三种SELP多态性进行初步基因分型,将其作为测定分析灵敏度的参考方法。用文献报道为c2266A>C的引物进行PCR‐HRM检测。其余两个多态性的引物采用引物‐BLAST设计。采用三种不同基因型的样品进行精密度检测。每个多态性选择20个野生型、10个杂合型和10个纯合样本进行准确性、分析灵敏度和特异性检测。结果与可接受性标准符合率≥95%。
除C.1918 g > T和c.2266A>C的分析灵敏度外,所有验证参数的结果一致为100%,符合率为90%。两种方法的重复分析表明,PCR‐HRM在初始基因分型和正确基因分型上均存在错误,Sanger测序证实了这一点。
本研究证实对于C.992 g > A, c.1918 g > T, c.。2266 C > SELP多态性基因分型,PCR‐HRM是一种精确、准确、特异的方法。
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