【衡道丨干货】术中冰冻快速诊断技术——术中冰冻的切片标准、制片注意事项

术中冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。其制作过程较石蜡切片相对简便、快捷，都应用于手术中快速病理诊断。 手术中快速活体组织病理学检查是临床医师在实施手术过程中，就与术中处理方案有关的疾病诊断问题请求病理医师快速进行的急会诊，尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。

 怎样的切片才算一张标准的冰冻切片？

个人观点认为一张标准的冰冻切片应该是：

组织切片完整，均称、切片厚度4-6微米、无刀痕、裂隙、切片平坦、无皱褶卷边折叠现象、切片无污染物、组织细胞核与细胞浆染色对比清晰，切片无松散，裱贴位置适当、切片整洁，标签端正粘贴牢固，编号清晰，封片无气泡，盖玻片周围无胶液外溢，透明度好，无冰晶等人伪差出现。

如何做出一张标准的冰冻切片，冰冻切片最需要注意的要点是什么？

以下分享几种快速冰冻切片的注意要点供大家参考。

制作冰冻切片时，有几个要特别注意的问题，需要牢记：

1.速冻：

是冰冻切片的关键，因为只有速冻才能减少组织内的冰晶，如果有条件，最好的方法就是利用液氮快速冷冻制作冰冻切片的方法，如果没有，可将冷冻锤迅速压在组织上，冻好后就可切片。特别适合用于较脆（肿瘤）组织，但要注意不要冷冻过头，不然会引起组织发脆，或冷冻头与组织分离。

2.包埋剂：

常用的冰冻切片使用的包埋剂是OCT或者市面上的合成胶水。OCT是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体，骤冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因而能保证优化的OCT温度，并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用，可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。合成胶水使用效果与OCT相似，但价格低廉，不伤刀。

3.切片刀：

最好能使用一次性刀片（冰冻专用刀片），在超低温情况下，切片的硬度及韧性非常关键，一般的切片刀片不具备这样的功能，只有特制的刀片才适宜，冰冻切片时，注意先将刀片事先安装好。

4.取材：

送检标本均为术中送检新鲜组织，避免过度湿润，切忌以盐水等浸泡，严禁放入福尔马林固定液中，最好用干纱布包裹组织送检，在由经验丰富的病理医师取材，选取代表性的部位取材，切取的组织块大小适宜（厚度＜2mm），并尽快置于冷冻组织切片机上制备切片。

5.切片机：

应长期处于恒温冷冻状态，经常的开关机器电源容易造成压缩机的损伤。

6.术中冰冻切片HE染色：

冷冻切片HE染色操作要求时间短，因此，各种试剂要经常更换新液，最好常规石蜡切片染色液分开染色，使用含酸性的固定液时，要注意充分的水洗。

7.固定液：

固定液的选择、固定的时间都对冰冻切片HE染色有着重要的影响。

固定液的种类比较多，不同固定液，固定的时间长短不一，因为快速切片的固定与染色之间有着相互的联系。

以下两张图片是同一切片组织，使用不同的固定液，所呈现的组织细胞形态。

对比两张图片，可以发现，固定液的选择对细胞的形态HE染色的影响

当组织固定液选择不合适时，组织细胞形态会有所不同，将会对病理医师的诊断造成影响。

 讨论与结论

高质量的冰冻切片是确保快速病理诊断准确性的关键，为手术中确定病变范围提供可靠依据。因此，在冰冻切片制作过程中，必须注意以上要点，确保操作无误。当然，除此之外，还需确保其满足基本的诊断需求，并在此基础上进一步提高冰冻切片的整体质量。