CLIN CHEM LAB MED:建立人类抗dfs70抗体的国际自身抗体参考标准
2019-11-03 MedSci MedSci原创
国际自身抗体标准传统上是基于从单一受试者血浆中获得样本分析,因此其仅代表个体的免疫反应,可能不能解释一般人群的异质性。
国际自身抗体标准传统上是基于从单一受试者血浆中获得样本分析,因此其仅代表个体的免疫反应,可能不能解释一般人群的异质性。抗dfs70自身抗体在间接免疫荧光法检测HEp-2细胞(HEp-2 IFA)上产生一种特征性的致密细斑点(DFS)核,这是与自身免疫性作用的结果。 我们基于逐步收集来自数百个具有抗DFS70抗体的个体的血清样本,提出了一种开发自身抗体参考标准的新策略。
为期两年内,研究人员从常规HEp-2 IFA中选择血清样本,标准包括DFS HEp-2
IFA模式滴度≥1:640; 在三种分析物特异性测试(Western印迹[WB],酶联免疫吸附测定[ELISA]和化学发光免疫测定[CLIA])中具有抗DFS70反应性。将各个样本的等分试样合并为逐步增大的样本库,并逐步验证各个样本的中间样本库,验证的中间库合并为冻干的最终库。
研究总共741个经过验证的样品产生了750 mL最终合并库,并将其冻干成数千个200μL等分试样。 重组的等分试样在ELISA,CLIA和WB以及高滴度DFS HEp-2
IFA模式中产生了预期的抗DFS70反应性。 七个国际专家中心使用HEp-2 IFA,ELISA,WB和免疫沉淀法确认了冻干库的抗DFS70反应性。
这项概念验证研究为建立自身抗体检测的血清参考标准提供了一个创新和有效的策略。抗DFS70标准将整合自身抗体标准化委员会(ASC,www.autoab.org)的标准小组,为进行正确的分析验证和DFS模式以及其他HEp-2 IFA模式解释的教育做出贡献。
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